勋博生物胰腺炎模型
一、雨蛙素联合LPS诱导急性胰腺炎模型实验服务
勋博生物雨蛙素（Cerulein）作为胆囊收缩素类似物，通过过度刺激腺泡细胞分泌，诱导胰腺内胰酶异常激活及空泡化变性，引发局部水肿和炎性浸润。脂多糖（LPS）作为革兰氏阴性菌细胞壁成分，可激活Toll样受体4（TLR4），介导MyD88/NF-κB信号通路，放大全身炎症反应。二者协同作用可模拟重症急性胰腺炎（SAP）的核心病理特征。
一、实验准备
- 实验动物：通常选用雄性SD大鼠或Balb/c小鼠，年龄和体重需在一定范围内（如大鼠8周龄，250~300g；小鼠根据具体品系和实验需求确定）。实验前需禁食一段时间（如18小时），但自由饮水。
- 实验试剂与材料：雨蛙素：作为诱导剂，需将其溶于生理盐水制备成适当浓度的溶液、LPS：协同雨蛙素诱导急性胰腺炎。生理盐水：用于稀释雨蛙素及LPS。注射器和针头：用于腹腔注射。
二、实验步骤
- 雨蛙素配制：取1mg的雨蛙素溶于1mL生理盐水中，配制成1mg/mL的母液，并进行冻存处理。在使用前，需将冻存的母液解冻，然后用生理盐水进一步稀释至5μg/mL（或根据实验需求调整浓度）的工作液。
- 腹腔注射雨蛙素：将实验动物固定，使用注射器将雨蛙素工作液按50μg/kg的剂量腹腔注射到动物体内。注射次数通常为连续7次，每次间隔时间为1小时。
- 联合注射LPS：在最后一次雨蛙素注射后，立即腹腔注射LPS，剂量为10mg/kg。LPS的加入可以破坏炎症介质的正常反应，进而将局部的胰腺炎发展为全身性的严重性炎症反应，加重在雨蛙素诱发基础上的胰腺炎。
- 饲养与观察：注射完毕后，将实验动物分笼饲养，自由饮水和摄食。观察实验动物的生存状态、体重变化、行为表现等。根据实验需求，在特定时间点处死实验动物，取胰腺组织进行病理学检查、生化指标检测等。
三、模型验证
- 病理学检查：
- 通过HE染色等病理学检查方法观察胰腺组织的病理变化，如水肿、炎性细胞浸润、腺细胞坏死等。
- 成功的模型应具有典型的急性胰腺炎病理特征。
- 生化指标检测：
- 检测血清中淀粉酶、脂肪酶等酶的活性，以及炎症因子（如IL-1β、IL-6、TNF-α等）的表达水平。
- 血清学：AMY、LPS活性（碘-淀粉比色法）；TNF-α、IL-6（ELISA）。
- 组织病理：石蜡包埋切片（4 μm），HE染色评估水肿、坏死及炎性浸润。
- 分子机制：Western blot检测NF-κB p65、Caspase-3蛋白表达。
胰腺组织大体观察
ELISA检测
HE染色（小肠、胰腺）
四、注意事项
- 无菌操作：在整个实验过程中，应严格遵守无菌操作规程，以防止感染影响实验结果。
- 剂量控制：雨蛙素和LPS的剂量对模型的成功与否至关重要，应根据实验需求确定合适的剂量。剂量过大可能导致实验动物死亡，剂量过小则可能无法成功诱导急性胰腺炎。
- 实验条件控制：在实验过程中，应严格控制实验条件，如温度、湿度等，以确保实验结果的可靠性。
- 动物福利与伦理：在实验过程中，应关注实验动物的福利状态，避免不必要的痛苦和折磨。同时，实验方案应经过伦理审查并获得批准。
五、模型应用
- 构建成功的雨蛙素联合LPS诱导急性胰腺炎模型可用于研究急性胰腺炎的发病机制、评估治疗方法的疗效以及筛选潜在的治疗药物等。
- 可用于消退素RvD1通过降低IL-6、TNF-α减轻炎症。
- 研究肠屏障功能障碍（DAO酶升高、肠黏膜凋亡）或肝损伤（ALT/AST升高）。
六、模型总结：雨蛙素联合LPS诱导的SAP模型具有病理特征明确、重复性佳的特点，可稳定模拟胰酶异常活化、炎症风暴及远端器官损伤的级联反应。勋博生物通过标准化操作流程（如雨蛙素6次注射+LPS单次强化）确保模型稳定性，为靶向TLR4/NF-κB通路的药物研发提供可靠平台。
二、牛黄胆酸钠诱导急性胰腺炎模型
勋博生物模仿胆汁反液，是目前公认的急性坏死胰腺炎的经典模型。主要通过注射胆汁酸的两种成分，即甘氨脱氧胆酸和牛黄胆酸钠诱发急性胰腺炎。特点：此法诱导的重症胰腺炎模型稳定，能很好的模拟急性坏死胰腺炎临床特征。该模型严重程度取决于灌注物、灌注物浓度、灌注压、灌注量和时间。此造模方法具有动物死亡率高、存活期短、不利于对在体组织的观察、操作费时、易造成胆萎、难以观察药物治疗效应等缺陷。
一、实验材料
- SD大鼠（雄性，180-220g）
- 造模方法：逆行胰胆管插管，夹闭胆总管，注射牛磺胆酸钠溶液。假手术组进行胰胆管穿刺，不予以注射药物。12 h后成功制备急性胰腺炎模型。
- 评价指标：大体观察、HE染色、ELISA检测
二、模型验证
胰腺大体观察
胰腺组织HE染色
ELISA检测