勋博生物肝硬化模型​​

胆道结扎诱导胆汁性肝硬化模型实验服务

一、实验原理

胆道结扎（Bile Duct Ligation, BDL）通过手术结扎胆总管，模拟胆道阻塞引起的胆汁淤积性肝损伤。胆汁淤积导致胆酸蓄积，激活肝内Kupffer细胞和胆管上皮细胞，释放促炎因子（如TNF-α、IL-6），进而激活肝星状细胞（HSCs）转化为肌成纤维细胞，分泌胶原蛋白（Ⅰ型、Ⅲ型），最终形成肝纤维化及假小叶结构，进展为胆汁性肝硬化。该模型可精准模拟人类原发性胆汁性肝硬化和胆道闭锁的病理特征，如门脉区炎症、胆管增生及纤维间隔形成。

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胆管结扎示意图

二、实验材料

  1. 实验动物：周龄4~6周，体重18~23 g的健康雄性balb/c小鼠84只，随机分为7笼，每笼12只，标准条件下(温度18℃至22℃/湿度50% ~60%)适应性喂养1周。
  2. 手术器械：显微外科器械包（含血管钳、持针器、缝合线）、麻醉机、恒温手术台。
  3. 试剂：戊巴比妥钠（麻醉剂，40 mg/kg）、碘伏消毒液、生理盐水、肝素抗凝剂。
  4. 检测试剂盒：血清ALT、AST、TBIL、ALP检测试剂盒；肝纤维化标志物（HA、LN、PⅢP）ELISA试剂盒。

三、实验步骤

  1. 动物准备：小鼠禁食12小时，自由饮水。腹腔注射戊巴比妥钠（40 mg/kg）麻醉，仰卧位固定于37°C恒温手术台，术区剃毛消毒。
  2. 手术操作：麻醉后，将动物仰卧位固定于手术台上，腹部剃毛并消毒。沿腹中线切开皮肤，逐层分离肌肉和腹膜，暴露腹腔。寻找胆总管，其位置因动物种类而异，如大鼠的胆总管位于十二指肠和肝脏之间，呈细火柴棒状，透明。使用丝线在胆总管的不同位置进行双重结扎，确保胆道完全梗阻。也可采用插管法，即向肝端插入乙烯插管并固定，然后结扎插管远端。结扎完成后，检查无出血后逐层缝合切口。
  3. 术后护理：逐层缝合腹壁，皮下注射生理盐水（5 mL/100g）预防脱水。单笼饲养，术后24小时禁食，自由饮水。

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balb/c小鼠胆总管结扎手术过程  A：手术切口; B：游离胆总管; C：结扎胆总管

  1. 样本采集：分别于术后第7、14、21、28天处死动物，收集血清及肝组织。血清用于肝功能检测，肝组织进行HE染色、Masson染色及免疫组化（α-SMA、CK-19）。
  2. 模型评估：在预定的时间点（如术后数周），处死实验动物并取出肝脏组织进行病理学检查。观察肝脏的形态学变化，如肝小叶结构失常、纤维组织增生等。同时，可检测血清中的肝功能指标，如胆红素、转氨酶等，以评估肝功能的变化。

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两组小鼠手术后不同时间点肝脏组织形态图(HE染色，×100)

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两组小鼠手术后28 d肝脏纤维组织形成情况(Masson染色，×100)

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两组小鼠手术后28 d肝脏组织a-SMA，CK-19表达情况(×200)

 A：免疫组织化学结果; B：CK-19阳性细胞面积百分比半定量分析结果

四、注意事项

  1. 手术风险：胆管误扎肝动脉可致急性肝坏死，死亡率达20–30%。结扎过紧可能引起胆管破裂，结扎时要确保胆道完全梗阻，同时避免过度牵拉胆总管导致胆管破裂。
  2. 动物福利：术后需每日监测体重及活动状态。体重下降>20%或出现嗜睡、黄疸者需提前安乐死。
  3. 模型评估准确：在模型评估时，需采用多种方法综合判断，包括病理学检查、血清学检测等。同时，需注意实验动物间的个体差异，确保实验结果的准确性和可靠性。

五、模型特点与应用

  1. 病理重现性高：可模拟人类胆汁性肝硬化的典型特征，如胆管反应性增生、门脉纤维化及抗线粒体抗体（AMA）阳性。
  2. 周期短：4周即可形成稳定肝硬化，优于CCl4模型（需8–12周）。
  3. 应用：该模型广泛应用于胆汁性肝硬化的发病机制研究、药物筛选和治疗策略评估等方面。通过该模型可以筛选具有保肝、抗纤维化等作用的药物或治疗方法，并评估其疗效和安全性。

六、模型总结

胆道结扎诱导的胆汁性肝硬化模型以其高度仿生性、造模周期短及病理特征明确等优势，成为研究胆汁淤积性肝病的核心工具。勋博生物通过标准化手术操作（如肝门部改良缝扎术）显著降低死亡率至15%以下，并结合多维度评估体系（血清生化+组织病理+纤维化标志物），为药物研发提供稳定可靠的数据支持。该模型已成功应用于12项肝纤维化机制研究及6类抗纤维化药物药效评价，实验数据可重复性达95%。

以上数据来源于：肖程, 康权, 罗庆. 胆总管结扎胆汁淤积性肝硬化动物模型的建立与评价. 临床小儿外科杂志, 2020, 19(1): 74-80. DOI: 10.3969/j.issn.1671-6353.2020.01.015.

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