勋博生物胃肠炎模型

OVA联合卵白蛋白诱导嗜酸性粒细胞性胃肠炎模型实验服务

勋博生物嗜酸性粒细胞性胃肠炎（Eosinophilic Gastroenteritis, EG）是一种以胃肠黏膜嗜酸性粒细胞（EOS）浸润为特征的过敏性疾病。本模型通过卵清蛋白（OVA）联合免疫佐剂氢氧化铝（Al(OH)₃）诱导Th2型免疫应答，激活IL-5介导的EOS分化与迁移通路。IL-5作为关键细胞因子，通过结合EOS表面受体，促进骨髓EOS释放并趋化至胃肠道。同时，OVA经灌胃激发后，抗原穿透肠黏膜屏障，激活肥大细胞释放组胺及IgE，进一步招募EOS浸润并释放主要碱性蛋白（MBP），导致黏膜损伤、上皮增生及组织纤维化。

一、实验准备

  1. 实验动物：通常选用SPF级Balb/c小鼠，雌性，8周龄左右，体重在一定范围内（如18~22g）。选用该品系因其Th2免疫应答敏感性强，利于过敏模型构建。实验前需对小鼠进行适应性饲养，确保其状态良好。
  2. 实验试剂与材料：OVA（卵白蛋白）：作为致敏原和激发剂。氢氧化铝佐剂：用于增强OVA的免疫原性。生理盐水：用于稀释OVA和氢氧化铝佐剂。1mL注射器：用于腹腔注射和灌胃。
  3. 其他实验器材：如离心管、抗凝管、显微镜、血细胞分析仪等。

二、实验步骤

  1. 试剂配置：致敏工作液配置：将OVA溶于氢氧化铝佐剂中，配制成一定浓度（如0.5mg/mL）的致敏工作液，现配现用。激发工作液配置：将OVA溶于生理盐水中，配制成一定浓度（如0.1g/mL）的激发工作液，现配现用。
  2. 致敏阶段：小鼠分别于第1天和第15天腹腔注射0.1mL致敏工作液。注射时注意无菌操作，避免感染。
  3. 激发阶段：小鼠分别于第20天、第22天和第24天灌胃0.1mL/只的激发工作液。灌胃前需禁食一段时间（如4~6小时），以确保OVA能够充分与胃黏膜接触并引发免疫反应。
  4. 样本采集与检测：
    1. 在第24天致敏后10~12小时，小鼠眼内眦采血100μL抗凝，用于全自动血细胞分析仪检测嗜酸性粒细胞（EOS）数量。
    2. 在第25天，小鼠麻醉后处死，取血清、胃和肠道（空肠）组织进行病理检测。
    3. 血清学检测：末次激发后24小时麻醉取血，离心分离血清，ELISA检测IgE、IL-5水平。
    4. 组织病理学：取胃、空肠及结肠组织，4%多聚甲醛固定，石蜡包埋后切片（5 μm），HE染色评估EOS浸润及黏膜损伤，免疫组化检测MBP表达。
    5. 外周血分析：抗凝全血经溶血处理后，流式细胞术计数EOS（CCR3⁺/Siglec-F⁺细胞群）。

四、模型验证

  1. 病理学检查：通过HE染色观察胃和肠道组织的病理变化，如嗜酸性粒细胞浸润、水肿、充血等。成功的模型应具有典型的嗜酸性粒细胞性胃肠炎病理特征。
  2. 生化指标检测：检测血清中IgE水平的变化。与正常组相比，模型组小鼠的IgE水平应显著升高。

lgE检测

小鼠胃黏膜EOS（HE染色，×200）

A：正常对照组胃窦；B：OVA⁃EG组胃窦

小鼠胃黏膜MC（甲苯胺蓝染色，×200）

A：正常对照组胃窦；B：OVA-EG组胃窦

电镜观察两组小鼠胃窦黏膜MC脱颗粒变化（×7000）

A：对照组胃窦；B：OVA-EG组胃窦。

两组小鼠胃窦黏膜组织IL-5 mRNA表达比较

五、注意事项及模型应用

  1. 无菌操作：在整个实验过程中，应严格遵守无菌操作规程，以防止感染影响实验结果。
  2. 剂量控制：OVA和氢氧化铝佐剂的剂量对模型的成功与否至关重要。剂量过大可能导致小鼠死亡或产生严重的免疫反应；剂量过小则可能无法成功诱导嗜酸性粒细胞性胃肠炎。
  3. 实验条件控制：在实验过程中，应严格控制实验条件，如温度、湿度、光照等，以确保实验结果的可靠性。
  4. 动物福利与伦理：在实验过程中，应关注小鼠的福利状态，避免不必要的痛苦和折磨。同时，实验方案应经过伦理审查并获得批准。
  5. 适用于抗过敏药物（如IL-5抑制剂、白三烯受体拮抗剂）的药效评价。
  6. 通过IL-5基因敲除鼠验证EOS浸润的依赖性，或利用eotaxin缺陷鼠研究趋化因子协同作用。

七、模型总结：勋博生物构建的OVA诱导EG模型高度模拟人类疾病特征，包括Th2免疫偏移、EOS特异性浸润及黏膜屏障破坏。其成模率达90%，且通过PLGA包裹抗原提升肠道靶向性，较传统腹腔注射法更贴近食物过敏病理过程。

上述数据来源于doi：10.7655/NYDXBNS20181106

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