勋博生物癫痫动物模型 -

勋博生物癫痫动物模型

一、勋博生物癫痫动物模型的分类与构建原理

癫痫模型按诱导机制分为四类：

遗传模型：
- 原理：通过基因编辑（如CRISPR-Cas9）或自发突变引入癫痫相关基因突变。
  - GAERS大鼠：Cacna1h基因突变导致T型钙通道异常，模拟失神癫痫的尖慢波放电（SWD）。
  - Scn1a/Scn2a基因小鼠：钠离子通道缺陷导致Dravet综合征样发作。
- 适用研究：遗传性癫痫机制及靶向治疗。
化学诱导模型：神经毒素激活特定受体引发神经元超同步放电。
- 匹罗卡品（Pilocarpine）：激动胆碱能受体，诱发颞叶癫痫（TLE）伴海马硬化。
- 海人酸（KA）：谷氨酸类似物，导致兴奋性毒性及自发性发作。
- 戊四氮（PTZ）：阻断GABA_A受体，诱导全身强直阵挛发作。
电刺激模型
- 点燃（Kindling）模型：重复亚阈值电刺激杏仁核或海马，逐步降低发作阈值，模拟TLE的慢性进展。
- 6-Hz角膜电刺激：非侵入性诱导耐药性局灶性发作。
创伤性脑损伤（TBI）模型：机械损伤或铁离子注射诱导脑组织瘢痕形成，引发获得性癫痫。

化学诱导机制示意图（基于）：KA激活谷氨酸受体→神经元兴奋性增高→癫痫放电

二、勋博生物癫痫模型常用实验动物及选择依据

三、勋博生物癫痫模型模型有效性评估指标

四、勋博生物癫痫模型典型案例

大鼠癫痫模型构建：
- 采用随机数字表法将SD大鼠随机分为癫痫组20只和对照组10只，适应性饲养1周后进行模型构建。
- SD大鼠麻醉后将其固定于立体定位仪上，剪去头部毛发，碘伏棉球局部消毒后，切开头皮，暴露颅骨表面。
- 根据Watson图谱确定右侧海马位置（前囟后5mm，右侧旁开4.0ｍｍ，垂直深度4.0ｍｍ），用电钻小心钻透颅骨，应用微量注射器分别在注射位点缓慢注入1.2ul KA（0.5ug/ul；癫痫组）或1.2ul 生理盐水（对照组）。
- 注射完毕后，将微量注射器在原位留置5min再缓慢拔出，缝合皮肤切口。
- 用电子监控设备监测SD大鼠麻醉苏醒后行为学变化，采用Racines分级标准来对大鼠行为进行评分，选用癫痫发作级别达到Ⅳ级或Ⅴ级的癫痫模型鼠用于后续实验。
Micro PET/CT

不同时期SD大鼠Micro PET/CT图

病理染色结果
- HE染色
  - 对照组：海马区细胞形态基本正常，排列整齐，胞核清楚，胞质染色均匀，核仁明显；
  - 癫痫组：海马区细胞排列紊乱，细胞形态不完整，残留的神经元胞体皱缩，突起减少，核仁消失，胞质疏松，部分齿状回有增宽现象。
- 免疫荧光染色
  - 两组均有SV2A特异性染色；
  - 癫痫组：右侧海马（注入KA侧），SV2A荧光强度较对照组降低，以海马 CA3区域降低为显著。

大鼠脑组织病理染色图

左列：癫痫组（上排）和对照组（下排）右侧海马区域ＨＥ染色（×40）结果；

右列：癫痫组（上排）和对照组（下排）右侧海马区域突触囊泡 2A蛋白（SV2A）免疫染色（×100）结果。与对照组相比，癫痫组中SV2A免疫荧光信号（红色）降低，以海马CA3区域降低为著。CA3、CA1为海马的2个区域，DG为齿状回；细胞核DAPI染色荧光信号为蓝色。

五、勋博生物癫痫模型不同模型优缺点对比

六、勋博生物癫痫模型未来方向